使用多张可逆饱和荧光跃迁显微镜进行超切片

作者

安德烈亚斯·博登,德克·奥莱赫,安德鲁·约克,阿尔弗雷德·米利特-锡金 & 伊拉里亚·泰斯塔

摘要

光片荧光显微镜是多细胞系统四维生物成像的宝贵工具，因为它具有快速的体积成像和最小的照明剂量。然而，由于光片的宽度，检索精细的亚细胞信息是具有挑战性的，特别是在活细胞中。在这里，使用可逆可切换荧光蛋白 和用于光开关的周期性光模式，我们展示了一种用于亚细胞结构快速体积成像的超分辨率成像方法，称为多片 RESOLFT。同时创建宽度远低于衍射极限的多个发射片，提高记录速度，以提供超切片能力。我们的技术与各种RSFP兼容，因为它对开关周期数的要求最小，可用于研究大量的细胞结构。我们在三维空间中跟踪细胞过程，如细胞分裂、肌动蛋白运动和病毒样颗粒的动力学。