雷尼绍为其 inVia 共焦拉曼显微镜引入了荧光寿命成像显微镜 (FLIM) 功能。该系统与时间相关单光子计数 (TCSPC) 专家 Becker & Hickl 合作,将拉曼和 FLIM 结合在一台仪器中。这种集成可以通过像素到像素的相关性叠加 FLIM 和拉曼图像,从而增加对一系列应用中样本的理解。
在该系统中,当来自脉冲激光的光与荧光团相互作用时,使用先进的检测器和高速电子设备测量荧光寿命。该荧光寿命是荧光团在通过发射光子返回基态之前保持在激发电子状态的特征时间。荧光衰减的寿命对分子环境和由此产生的分子构象变化很敏感。FLIM 技术可用于研究从 pH/离子/氧浓度到分子结合的一系列特性。
结合 FLIM 与拉曼显微镜
FLIM 和拉曼显微镜是对生物细胞和组织切片进行无标记成像的互补方法。FLIM 提供了对分子相互作用的洞察力,并且执行速度至少比拉曼成像快 10 倍。拉曼光谱具有高化学特异性和高分辨率化学图像。这种技术组合非常适合通过 FLIM 快速识别感兴趣的区域,然后通过拉曼成像进行化学和结构表征。
对于 FLIM 数据分析,Becker & Hickl 的综合软件包含在多指数、不完整和移位分量分析模型中。该软件还包括专有的相量分析,以区分终生人群。由于两种成像模式都使用了高精度雷尼绍 MS30 高速编码平台,荧光寿命和拉曼图像可以直接叠加。